Методы демиургов

А что, если просто пробить дыры в клеточной мембране, через которые смогут беспрепятственно пройти «чужие» ДНК? «Хорошая идея!» — подумали ученые и поместили раствор с живыми клетками и дополнительными молекулами ДНК в пластиковые кюветы с алюминиевыми электродами. Затем с помощью импульсов высокого напряжения создали в мембранах клеток временные крошечные поры, сквозь которые «чужие» ДНК проникают в клетку. Через некоторое время поры закрываются и клетки остаются целыми и невредимыми, но уже «трансформированными», то есть с чужой ДНК. Этот метод называется электропорацией и является наиболее простым и эффективным методом введения молекул ДНК в клетки. Но до недавнего времени его использовали только в немногих российских лабораториях. Почему? Все просто: далеко не в каждой лаборатории был достаточно дорогой прибор — электропоратор (рис. 5).

Рисунок 5. Электропоратор.

«Если хочешь сделать что-то хорошо — сделай это сам», — подумал А. Грессман в 1970 году. И ввел в клетку немного жидкости (около 10-8 мкл раствора с ДНК) с помощью стеклянного микрокапилляра. Этот метод называется микроиньекцией, его достоинство — возможность ввести ДНК в конкретную часть клетки (например, ядро). Эксперимент проводится на предметном столике микроскопа с применением микроманипуляторов и микрошприцев (рис. 6).

Рисунок 6. Введение ДНК путем микроиньекции.

«Методы получения трансгенных морских животных»

В период между 1983 и 1986 годами была создана первая генная пушка (рис. 7а и 7б). Ее разрабатывали на основе устройства для автоматического забивания гвоздей. На шарик из вольфрама наносили ДНК и выстреливали им в клетки, растущие в чашке Петри. Шарики разрывают стенки клеток, входят в цитоплазму и ядра и доставляют туда ДНК. Из-за силы бомбардировки ткань по центру чашки, как правило, погибает. Однако по периметру остаются живые и хорошо трансформированные клетки. Их и культивируют в дальнейшем, чтобы получить трансгенные растения. Здорово, правда? Кому из нас не хотелось бы пострелять шариками с ДНК по клеткам! Ученым тоже понравилось, и этот метод сейчас широко применяется. Только вольфрам оказался токсичным для клеток, поэтому вместо него шарики делают из золота или серебра [10].